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FACS

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elodiepayet's version from 2018-06-10 20:25

Section 1

Question Answer
cellules sont comment ? en file indienne
cellules scannées par quoi ?laser bleu
Analyse des cellules ? 1) Taille mesurée par diffraction 2) densité de granulation par absorption 3) présence d'Ag ou non sur la surface
Si la population est marquée par unAc ? Laser excite le fluorochrome. Il va émettre de la lumière colorée qui sera détectée par un détecteur. L'information lumineuse sera collectée par un ordinateur qui détermine les cellules à collecter ou non = selon que la cellule corresponde aux critères fixés par l'opérateur, les goutes sont plus ou moins chargée. Leur trajectoire va plus ou moins dévier en passant entre 2 électrodes qui produisent un champ Electrique
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Section 2

Question Answer
Le fluorochrome absorbe quoi ? Energie d'une lumière d'une longueur d'onde précise
Le fluorochrome remet l'énergie absorbée par vibration et dissipation de chaleur / émission de photons d'une longueur d'onde + élevée
2 types de marquagedirect et indirect
marquage direct+ rapide / marquage sur Ac I / Une couche
marquage indirect+ sensible / plusieurs couches
Fluidicfaitpasser une cellule 1 par 1
Optiquesépare différentes longueurs d'onde en fonction de la taille
electronic transfert en donnée digitale
1 cellule résolution ? Bonne résolution du signal bien délimité
plusieurs cellules signal mauvais / - bonne résolution
Le diamètre du laser0,7 mm => peu précis
Rôle des lentilles de focalisation focalise le laser de manière à avoir un faisceau elliptique proche en taille des événements à analyser = très précis
FSC proportionnel à la taille de la cellule
FSC diffusion axiale
SSC proportionnel à la complexité interne cellulaire
SSC diffusionlatérale / + importante dans 1 structure très complexe
SP Short pass
BPBand pass
LPLong pass
Objectif des filtres à 45 degrés ? filtre ou miroir dichroïque => permet de réfléchir les longueurs d'onde exclues vers d'autres détecteurs
Application du FACSImmunophénotypage, tri cellulaire, prolifération, apoptose, contenu ADN, mesure Ca intracellulaire, protéine cytoplasmique
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Section 3

Question Answer
Marquage CFSE diffusionpassive
Rôle des estrades intracellulaires ?rendent la cellule + fluorescente
Marquage CFSE couple à quoi ?Aux amines des protéines intracellulaires
Marquage CFSE toxique ou pas ? Peu cytologique
Stable combien de temps ? Jusqu'à 8 semaines
Marquage CFSE répartition comment ? égale entre les cellules filles
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Section 4

Question Answer
Comptage des cellules titre (cellules/mL)Titre (cellules/ml) = (nombres ce cellules comptées/3) X dilution X 10 000
La surface d’un grand carré 1mm x 1mm = 1mm2
Le volume occupé par la solution entre lame et lamelle (0.1 mm) sur un grand carré0.1 mm x 1 mm2 = 0.1 mm3 = 0.1 microlitre
L’hexosaminidase quoi ?Enzyme lysosomiale
L’hexosaminidase intervient dans quoi ? dans la digestion des gangliosides (glycosphingolipides contenant 2 ou 3 molécules d’acide sialique liées à des résidus galactose).
L’hexosaminidase catalyse quoi ?l’hydrolyse de la liaison osidique d’une N-acétylhexosamine de l’extrémité non réductrice d’un glycan.
solution « STOP »0.1 M de tampon Glycine-NaOH, pH 10.4 contenant 5 mM d’EDTA
Solution "stop" effetLe pH alcalin permet de déprotoner le p-nitrophenol en p-nitrophenolate qui a un coefficient d’absorbance plus important à 405 nm.
Calculer le temps de division 𝐶1.2n = 𝐶2
Absorbance 50%𝐴𝑏𝑆5𝑂%=𝐴𝑏𝑆𝑚𝑎𝑥−𝐴𝑏𝑠𝑚𝑖𝑛/2+𝐴𝑏𝑆𝑚𝑖𝑛
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