Create
Learn
Share

Chap-9

rename
mndyass's version from 2017-03-26 19:10

Repliement des protéines: théorie et expérimentation

 

Question Answer
Comment les protéines adopte leur conformation natives ?Spontanément dans des conditions physiologiques
Comment choisit-elle sa structure tridimensionnelle ?C'est la structure primaire qui va dicter sa structure tridimensionnel
Dans les condition Ad Hoc de quoi sont doté les structures biologiques?D'auto-Assemblage
Auto-Assemblage =Elles n'ont pas besoin de matrices externes pour acquérir leur conformation
memorize

Renaturation des protéines

 

Question Answer
Où trouver info. nécessaire repliement protéine permettant passage forme spaghettiProtéine repliée
ARNase A =Enzyme à une seule chaîne de 124 résidus & 4 ponts disulfure
A quoi sert ARNase A ?Dégradation ARN
Comment dénaturer la protéine ?Couper les ponts disulfure
Cité les étapes de l'expérience de Anfinsen1°Dénaturation protéine
2°Renaturation protéine
1°Dénaturation protéine (expliquez)Dans solution d'urée 8M avec du DTT (dithiothréitol) ou du 2-mercaptoethanol
Urée =Agent Chaotropique
=> Dénaturer la structure tridimensionnelle des protéines.
En interfèrent avec les liaisons hydrogènes, Interactions de Van der Waals & Forces hydrophobes
DTT =Agent réducteur
=> Réduit les ponts disulfures & déplie la protéine
2°Renaturation protéine (expliquez)Par élimination de l'urée par dialyse en présence d'O2 a pH8;
On obtient une protéine renaturée spontanément a 100% activité enzymatique
Oxygène =Agent oxydant
=> Reforme les ponts disulfures entre les résidus Cystéine
-Arrache leur hydrogène
Probleme de probabilité que l'O2 renatureOn a 1/105 % de la voir renaturée
Renaturation de l'ARNase ANe peut se faire par hasard !
Comment se fait alors la renaturation de la protéineEn gros c est sa structure primaire qui va la définir directement des le début.
Elle est dotée d'auto-assemblage donc c'est la structure primaire qui détermine les étapes de renaturations des le départ
memorize

Déterminants du repliement des protéines

 

Question Answer
Qu'est ce qui détermine le repliement d'une protéineSes résidus internes
De quoi le repliement dépend t-il?Des forces hydrophobes
Effet des mutations des résidus en surfaces?Affecte rarement la conformation de la protéine
Effet des mutations des résidus interne?Peuvent avoir de lourdes conséquences
Pq les protéines ont bcp d'hélice et de feuillets?Malgré qu'on penserait qu'elles sont encombrantes, c'est un encombrement efficace !
Selon quoi s'organise les hélices et feuillets?-Liaisons ioniques,
-Interactions ionique,
-Forces de Van der Waals.
Etude sur base du Lysozome T4 =>Il accepte sans problème jusqu'à 4 résidus inséré
-Tres peu de diminution de l'activité enzymatique
Structures protéiques assez résistantes aux changements
-Structure possèdent un fort pouvoir d'adaptation
-!Au niveau du coeur de la protéine les changements ont un fort impact. => Résidus HYDROPHOBES!!
Lysozome T4 =Enzyme nanomerique de 164 résidus
Caractéristique des protéines intrinsèques désordonnéesPrésentent des régions désorientées ne cristallisent pas (jusque 33% des Eucaryotes)
Ces régions non plié sont très utiles => Agissent comme interrupteur
Càd qu'elles pourront se replier au contact d'autres protéines
memorize

Mécanismes de repliement

 

Question Answer
Paradoxe Levinthal-Imaginons quine protéine retrouve sa conformation natives par essaie erreur, même la plus petite protéine 100 résidus aurait besoin de 13.7millard d'Anne pour la trouver (avec pour chaque angle Phi & Psi 3 possibilités)
=> IMPOSSIBLE FRERE
Proposition de LevinthalLe repliement = Série de mécanisme séquentiels spontanés
Durant c'est étapes => Evolution vers état natif + Augmentation importante de la stabilité (E.libre diminue)
Combien faut-il de temps pour que la protéine se replieQlq miliseconde
Comment étudier la re-naturation d'une protéine ?Par des mesures rapides pour suivre le repliement
memorize

 

MethodesStopped FlowDichroïsome circulaire
Quoi ?Mélangeur rapide
Appareil a flux interrompu
Repiler Proteins a froid
Comment ?Proteine dénaturer dans une solution par
-pH
-Chlorure Guanidium
-Urée
Rapidement modifié -> Repliement protéine
-Detecte changement rapides dans la structure de la protéine
-Estime contenu d'éléments de structure secondaires
(->hélices α et brins ß)
-Sur base Beer-Lambert Laws
memorize

 

Question Answer
Temps MortIntervalle séparent le début du mélange de celui des mesures
Temps mort protéines =>0,5 ms
Temps mort mélangeur ultra rapides =Ordre de 40microseconde
Loi de Beer-LambertA = ε.l.C
A = Absorbance
ε = Coefficient extinction molaire (varie avec λ)
l = Longueur cm trajet optique
C = Concentration
memorize

Rôle des protéines auxiliaires du repliement

Protéine disulfure isomérase

Peptidyl prolyl cis-trans isomérases

Chaperonnes moléculaires: le système GroEL/ES

Prediction de la structure des proteines

Prédiction des structures secondaires

Prédiction des structures tertiaires

Maladies conformationnelles: Amyloïdes et Prions

Comment les polypeptides sous forme déroulée aléatoire se replient pour acquérir leur structure native

La prédiction de structure des protéines fondée sur leur séquence

Comment des conformations anormales des protéines peuvent conduire à des maladies